Práctica 7: Colesterol total y triglicéridos.

1. Introducción.

Los triglicéridos son grasas que suministran energía a la célula. Al igual que el colesterol, son transportadas a las células del organismo por las lipoproteínas en la sangre. El aumento de los mismos es diversamente inespecífico: disfunciones hepáticas, diabetes mellitus, etc.

El colesterol es una sustancia grasa presente en todas las células del organismo. El hígado produce naturalmente todo el colesterol que necesita para formar las membranas celulares y producir ciertas hormonas. La determinación del colesterol es una de las herramientas más importantes para el diagnóstico y clasificación de lipemias, además de que su aumento es uno de los principales factores de riesgo cardiovascular.

2. Materiales.

TRIGLICÉRIDOS.

• 4 cubetas de espectrofotometría.
• Portacubetas.
• Varilla.
• Reactivos: tampón (R1), enzimas (R2) y triglicéridos CAL.
• Patrón.
• Muestra de plasma.
• Micropipetas de 1000 y 10 μL.
• Puntas de micropipeta.
• Espectrofotómetro.
• Gradilla.

COLESTEROL.

• 4 cubetas de espectrofotometría.
• Portacubetas.
• Varilla.
• Reactivos: tampón (R1), enzimas (R2), cholesterol cal.
• Patrón.
• Muestra de plasma. 
• Micropipetas de 1000 y 10 μL.
• Puntas de micropipeta.
• Espectrofotómetro.
• Gradilla.

3. Procedimiento.

TRIGLICÉRIDOS.

Preparación del RT: en primer lugar machacaremos la pastilla de enzimas (R1) dentro de su propio vial presionando una y otra vez con la varilla de vidrio. Éste polvo lo pasaremos al vial del tampón (R2) y homogeneizamos la disolución moviendo circularmente.

Colocamos las cubetas de espectrofotometría en el portacubetas y llenamos una de agua destilada. El resto los etiquetamos con las iniciales 'B' (Blanco), 'P' (Patrón) y 'M' (Muestra).

En las tres pipeteamos 1.000  μL del RT; no obstante, en el P pipeteamos 10 μL de Patrón y en la M, 10 μL de muestra de plasma.

Dejamos incubar las tres cubetas 10 minutos a temperatura ambiente.

Pasado dicho tiempo, encendemos el espectrofotómetro e introducimos la longitud de onda a la que vamos a medir: 505 nm. Ajustamos a 0 con la cubeta de agua destilada y nuevamente lo repetimos con la cubeta B; una vez así, introduciremos las dos cubetas restantes, una a una, y anotamos sus resultados correspondientes. 

B- 0.

M- 0'309.

P- 0'311.

A partir de los resultados aplicaremos la fórmula para averiguar la concentración:

COLESTEROL.

Preparación del RT: lo realizamos igual que con los triglicéridos.
El procedimiento es el mismo que el anterior pero con distintos reactivos.

Obtenemos:
B- 0.
M- 0'404.
P- 0'255.

Los cálculos son:

4. Normas de seguridad y posibles peligros.

Atenderemos al riesgo eléctrico de la toma de corriente del espectrofotómetro evitando que entren en contacto las manos o conductores eléctricos directamente con la toma. También evitaremos usarlo con las manos mojadas, sobre todo en la operación de enchufe y desenchufe, o la entrada de agua al sistema eléctrico. No se mira directamente a la llama ni a las fuentes de emisión (lámparas).

Además, tendremos que examinar el estado de las piezas de vidrio antes de utilizarlas y desechar las que presenten el más mínimo defecto, así como desechar el material que haya sufrido un golpe de cierta consistencia -aunque no se observen grietas o fracturas- para prevenir cortes con el material. 
Evitaremos la entrada de líquido al sistema por colocar la micropipeta en horizontal o al revés, así como no usar punta de micropipeta. Podrían ocasionar la contaminación y rotura de la micropipeta.

5. Observaciones.

Los valores de referencia de los triglicéridos en hombres es de 40-160 mg/dL; y de mujeres, 35-135 mg/dL.

Los valores de referencia del colesterol son:
Normal: <200mg/dL.
Moderado: 200-239 mg/dL.
Alto: >240 mg/dL.

6. Conclusiones.

El sujeto, -tanto si es hombre como mujer- tiene los triglicéridos (198'71 mg/dL) y el colesterol (316'86 mg/dL) altos.