Práctica 17: determinación cuantitativa de creatinina.

1. Introducción.

La creatinina reacciona con el picrato alcalino formando un complejo rojizo. El intervalo de tiempo escogido para las lecturas permite eliminar gran parte de las interferencias conocidas del método.

La creatinina es el resultado de la degradación de la creatina, componente de los músculos y puede ser transformada en ATP, fuente de energía para las células. 

La producción de la creatinina depende de la modificación de la masa muscular. Su eliminación se realiza a través del riñón, por lo que una retención de creatinina en sangre (junto a urea y ácido úrico) es indicativo de insuficiencia renal progresiva.

2. Materiales.

• R1 (ácido pícrico).
• R2 (hidróxido sódico).
• Creatinine cal (patrón primario acuoso de creatinina).
• Muestra: suero heparinizado humano.
• Espectrofotómetro.
• 4 cubetas para espectrofotometría.
• Baño termostático.
• Micropipetas.
• Puntas para micropipeta.
• Tubo de ensayo.
• Agua destilada.
• Gradilla.

3. Procedimiento.

En primer lugar es necesario preparar el reactivo de trabajo a partir de los R1 y R2. Para obtenerlo tan solo diluiremos a partes iguales ambos reactivos en un tubo de ensayo y con la respectiva micropipeta al volumen necesario (necesitamos 3 ml, por lo que mezclando 2 ml de R1 con 2ml de R2 estaría bien).

Enchufamos el espectrofotómetro a la toma de corriente y lo encendemos. Ajustamos la longitud de onda (492 nm) y lo dejamos así hasta que lo utilicemos.

Colocamos 3 cubetas en el portacubetas y las etiquetamos como 'Blanco', 'Patrón' y 'Muestra'. 

A continuación transferimos con una pipeta de 1.000-5000 μL un volumen de 1 ml del reactivo de trabajo preparado anteriormente en las tres cubetas. Por otro lado, le añadiremos 100 μL de patrón (creatinine cal) a la cubeta Patrón y lo mezclamos.

Seguidamente llevamos las tres cubetas al baño termostático que  ajustaremos a 37ºC. Esperamos 10 minutos hasta que se atemperen; mientras tanto, ajustamos el espectrofotómetro a 0 frente a agua destilada (cubeta con agua destilada).

Una vez lleguen a dicha temperatura, llevamos las cubetas cerca del aparato y taramos en blanco de reactivo. Con rapidez, pipeteamos 100 μL de la muestra (suero) en la cubeta de 'Muestra', la mezclamos, la colocamos en el espectrofotómetro y ponemos en marcha el cronómetro.

Al cabo de 30 y 90 segundos leemos las absorbancias (A1 y A2). Repetimos el mismo proceso con la cubeta 'Patrón' (pero sin pipetear la muestra).

4. Observaciones.

5. Conclusiones.
Blanco: 0 A.
Blanco Muestra: 0 A.
Patrón: 0'344 A ; 0'300 A.
Muestra: 0'730 A ; 0'760 A.

Los valores normales son:

Hombres 0,7 - 1,4 mg/dL. 

Mujeres 0,6 - 1,1 mg/dL.

El paciente tiene la creatinina alta. Esto puede suceder cuando existe un consumo de fármacos o suplementos alimenticios que dañan los riñones, provocando enfermedades renales; o bien cuando existe un exceso ejercicio.

6. Normas de seguridad y posibles peligros.

Atenderemos al riesgo eléctrico de la toma de corriente del espectrofotómetro y el baño termostático evitando que entren en contacto las manos o conductores eléctricos directamente con la toma. También evitaremos usarlo con las manos mojadas, sobre todo en la operación de enchufe y desenchufe, o la entrada de agua al sistema eléctrico. No se mira directamente a la llama ni a las fuentes de emisión (lámparas).

Evitaremos la entrada de líquido al sistema por colocar la micropipeta en horizontal o al revés, así como no usar punta de micropipeta. Podrían ocasionar la contaminación y rotura de la micropipeta.
Comprobar el nivel de agua destilada del baño termostático: debe estar lleno, pero sin tocar las tapas superiores.