Práctica 6: Cromatografía en capa fina.

1. Introducción.

La cromatografía engloba a aquellas técnicas de separación de solutos en disolventes basadas en las diferentes afinidades que muestran dichos solutos por dos fases distintas denominadas móvil y estacionaria.
En la cromatografía en capa fina, el soporte utilizado también es plano y consiste en una capa muy fina de partículas (fase estacionaria) situadas sobre una lámina de vidrio, plástico o aluminio. La fase móvil es un líquido adecuado a las sustancias a separar. El mecanismo de separación es la adsorción: interacciones de tipo electrostático, puentes de hidrógeno y Fuerzas de Van der Waals entre los solutos y las fases móvil y estacionaria, permitiendo que los solutos se fijen en la superficie de la fase estacionaria. 

2. Materiales.

• Láminas de gel de celulosa.
• Disolvente de cromatografía.
• Disolución reveladora (ninhidrina en acetona 0'2%).
• Muestra problema de aminoácidos en Eppendorf (leucina, alanina y glicina).
• Disolución de aminoácidos control en Eppendorf.
• Gradilla.
• Vidrio de reloj.
• Vaso de precipitado de 250 ml.
• Micropipeta de 10
• Puntas de micropipeta.
• Disolución de fase móvil.
• Lápiz.
• Regla

3. Procedimiento.

Dibujaremos en la lámina de gel de celulosa con el lápiz sin apretar una línea a 1'5 cm de distancia de la base,  ayudándonos de la regla. En dicha línea marcaremos dos puntos, los cuales estarán separados a 1 cm de distancia.

Una vez ambos Eppendorfs en la gradilla, abrimos el de Control y trasferimos una gota del mismo al punto de más a la izquierda. Desechamos la punta y colocamos otra para colocar otra gota en el punto de la derecha, pero ésta vez de la Muestra.

Dejamos secar ambas gotas. Cuando sea así, volvemos a colocar las gotas de la misma manera que realizamos anteriormente y dejamos secar de nuevo.

Finalmente dejamos caer disolvente de cromatografía en un vaso de precipitado, de modo que llegue aproximadamente a un dedo de distancia con respecto a a superficie del vidrio. Colocamos en el vaso la anterior lámina, estando la línea en contacto con el disolvente.

Dejamos reposar el tiempo que sea necesario para que el disolvente, la muestra y el reactivo ascienda por capilaridad.

Para poder observar los resultados, secaremos la lámina cuando el frente de solvente llegue hasta la parte superior y la rociaremos disolución reveladora.

Con la regla, medimos el frente del disolvente y las distancias desde la línea hasta el punto medio de cada aminoácido (en la muestra). Apuntamos resultados.

4. Observaciones.

La distancia desde la línea hasta el punto medio de cada aminoácido es de 1'2 cm y 4 cm; por otro lado, la distancia del frente de solvente es de 6'5 cm.
Por tanto, la relación al frente del solvente (Rf) es...

5. Conclusiones.

Nuestros compañeros realizaron una cromatografía en tres puntos con los aminoácidos arginina, fenilalanina y ácido glutámico aislados con el objetivo de ser comparada con las láminas que llevan la muestra. Al relacionar su lámina control con la lámina de la muestra (la nuestra) observamos que la primera mancha se trataba del aminoácido arginina (el de 1'2 cm) y la segunda, la fenilalanina (el de 4 cm). Por tanto se concluye que en la muestra no hay presencia de ácido glutámico.

6. Normas de seguridad y posibles peligros.

No tocaremos sin guantes la lámina de celulosa, ya que las partículas que contienen son tóxicas. 
Además, rociaremos la ninhidrina en un lugar abierto, con guantes y mascarilla debido a su alta capacidad para irritar ojos y piel, a una distancia no muy lejos de la lámina y realizando una primera pulverización de prueba lejos de cualquier contacto a alguien.