1. Introducción.
La turbidimetría consiste en la medición de la disminución de la intensidad de un haz de luz indicente al atravesar una suspensión de partículas capaz de dispersar el haz. Así pues, esta atenuación se produce gracias a los fenómenos de absorción y dispersión que experimenta la luz debido a las partículas por lo que este método es un tipo de espectrofotometría de dispersión y el aparato de laboratorio que lo lleva a cabo se denomina turbidímetro.
2. Materiales.
-
9 tubos de ensayo de 10 ml.
-
4 tubos de ensayo de 13 ml.
-
Muestra de orina en tubo cónico de 13 ml.
-
7 cubetas de espectrofotometría.
-
Portacubetas.
-
Puntas de micropipeta de distintos tamaños.
-
Micropipetas de distintos volúmenes.
-
Suero salino 0'9%.
-
Agua destilada.
-
Patrón de proteína.
-
Albúmina bovina.
-
Ácido sulfosalicílico.
-
Vaso de precipitado.
-
Pipeta de 10 ml.
-
Auxiliar de pipeteo.
-
Pipeta Pasteur.
-
2 gradillas.
9 tubos de ensayo de 10 ml.
4 tubos de ensayo de 13 ml.
Muestra de orina en tubo cónico de 13 ml.
7 cubetas de espectrofotometría.
Portacubetas.
Puntas de micropipeta de distintos tamaños.
Micropipetas de distintos volúmenes.
Suero salino 0'9%.
Agua destilada.
Patrón de proteína.
Albúmina bovina.
Ácido sulfosalicílico.
Vaso de precipitado.
Pipeta de 10 ml.
Auxiliar de pipeteo.
Pipeta Pasteur.
2 gradillas.
3. Procedimiento.
En primer lugar centrifugaremos la muestra de orina a 2.000 rpm durante 5 minutos. Cuando termine, extraemos con la pipeta Pasteur el sobrenadante y lo llevamos a un tubo de ensayo que etiquetaremos como 'orina'.
Preparación de los reactivos D1, D2, D3 y D4.
Antes de comenzar la preparación del contenido de las cubetas, necesitamos los reactivos D1, D2, D3 y D4 que los contendrán.
Colocaremos cuatro tubos de ensayo de 13 ml en una gradilla y los etiquetaremos con sus respectivos nombres. Los reactivos tendrán que tener lo siguiente:
A partir de estos tubos prepararemos otros 7 tubos de ensayo, los cuales contendrán:
La muestra que depositamos en el tubo PB es el sobrenadante de la orina que hemos centrifugado anteriormente junto a una gota de albúmina bovina.
Una vez tengamos todos los tubos, transferimos cada uno a su correspondiente cubeta y medimos en el espectrofotómetro cada una de ellas a una longitud de onda de 660 nm, dentro de la región visible.
Antes de comenzar la preparación del contenido de las cubetas, necesitamos los reactivos D1, D2, D3 y D4 que los contendrán.
Colocaremos cuatro tubos de ensayo de 13 ml en una gradilla y los etiquetaremos con sus respectivos nombres. Los reactivos tendrán que tener lo siguiente:
A partir de estos tubos prepararemos otros 7 tubos de ensayo, los cuales contendrán:
La muestra que depositamos en el tubo PB es el sobrenadante de la orina que hemos centrifugado anteriormente junto a una gota de albúmina bovina.
Una vez tengamos todos los tubos, transferimos cada uno a su correspondiente cubeta y medimos en el espectrofotómetro cada una de ellas a una longitud de onda de 660 nm, dentro de la región visible.
4. Preguntas.
1. Representa la gráfica de los tubos P1-4
Para poder representar la gráfica debemos averiguar las concentraciones de cada tubo:
P1: 140mg/dl x 0,5 ml= ? x 2,5 ml -> ?= 28 mg/dl.
P2: 70 mg/dl x 0,5 ml= ? x 2,5 ml -> ?= 14 mg/dl.
P3: 35 mg/dl x 0,5 ml= ? x 2,5 ml -> ?= 7 mg/dl.
P4: 17,5 mg/dl x 0,5 ml= ? x 2,5 ml -> ?= 3,5 mg/dl.
Para averiguar la concentración de la muestra comparamos la absorbancia y la concentración de uno de los tubos que conocemos con la absorbancia de la muestra.
Por tanto: 0,767 A/ 0,989A = 28 mg/dl / ?
?= 36,10 mg/dl
Una vez tenemos todas las concentraciones representamos la gráfica:
2. ¿Por qué vemos turbidez?¿Qué hace el equipo con ella?
El equipo lo que hace es la disminución de la intensidad del haz de luz provocado por las grandes partículas que conforman la disolución.
5. Normas de seguridad y posibles peligros.
Atenderemos al riesgo eléctrico de la toma de corriente del espectrofotómetro evitando que entren en contacto las manos o conductores eléctricos directamente con la toma. También evitaremos usarlo con las manos mojadas, sobre todo en la operación de enchufe y desenchufe, o la entrada de agua al sistema eléctrico. No se mira directamente a la llama ni a las fuentes de emisión (lámparas). Además, tendremos que examinar el estado de las piezas de vidrio antes de utilizarlas y desechar las que presenten el más mínimo defecto, así como desechar el material que haya sufrido un golpe de cierta consistencia -aunque no se observen grietas o fracturas- para prevenir cortes con el material.
Evitaremos la entrada de líquido al sistema por colocar la micropipeta en horizontal o al revés, así como
no usar punta de micropipeta. Podrían ocasionar la contaminación y rotura de la micropipeta.
6. Observaciones.
Ninguna observación a destacar.
7. Conclusiones.
La concentración de la muestra es de 36'10 mg/dl.
No hay comentarios:
Publicar un comentario