Práctica 8: Determinación cuantitativa de proteínas totales.

1. Introducción.

Las proteínas son compuestos orgánicos macromoleculares ampliamente distribuidos en el organismo que actúan como elementos estructurales y de transporte. Se dividen en dos fracciones: albumina y globulinas. Su detección es útil para detectar hiperproteinemias ( hemoconcentración, deshidratación o aumento en la concentración de proteínas específicas) o hipoproteinemias ( hemodilución por defectos en la síntesis proteica, hemorragias o catabolismo proteico excesivo).

En esta práctica mediremos las proteínas totales a partir de la intensidad de color formado, el cual es proporcional a la concentración de las mismas. Dicho color lo dan las proteínas cuando están en un medio alcalino en presencia de sales de cobre y yoduro como antioxidante.

2. Materiales.

• Reactivos: R, T protein call.
• Patrón.
• Muestra.
• Micropipeta de 1.000 μL y 25 μL.
• Puntas de micropipeta.
• 4 cubetas de espectrofotometría.
• Portacubetas.

3. Procedimiento.

El procedimiento es sencillo: colocamos las cubetas de espectrofotometría en el portacubetas y llenamos una de agua destilada. El resto los etiquetamos con las iniciales 'B' (Blanco), 'P' (Patrón) y 'M' (Muestra).

En las tres pipeteamos 1.000  μL del RT; no obstante, en el P pipeteamos 25 μL de Patrón y en la M, 25 μL de muestra de plasma.

Dejamos incubar las tres cubetas 10 minutos a temperatura ambiente.

Pasado dicho tiempo, encendemos el espectrofotómetro e introducimos la longitud de onda a la que vamos a medir: 540 nm. Ajustamos a 0 con la cubeta de agua destilada y nuevamente lo repetimos con la cubeta B; una vez así, introduciremos las dos cubetas restantes, una a una, y anotamos sus resultados correspondientes. 

B- 0.

M- 0'553.

P- 0'528.

A partir de los resultados aplicaremos la fórmula para averiguar la concentración:

4. Normas de seguridad y posibles peligros.

Atenderemos al riesgo eléctrico de la toma de corriente del espectrofotómetro evitando que entren en contacto las manos o conductores eléctricos directamente con la toma. También evitaremos usarlo con las manos mojadas, sobre todo en la operación de enchufe y desenchufe, o la entrada de agua al sistema eléctrico. No se mira directamente a la llama ni a las fuentes de emisión (lámparas).
Evitaremos la entrada de líquido al sistema por colocar la micropipeta en horizontal o al revés, así como no usar punta de micropipeta. Podrían ocasionar la contaminación y rotura de la micropipeta.
En cuanto a los reactivos, R provoca quemaduras graves en la piel y lesiones oculares graves, además de ser nocivo para organismos acuáticos. Trabajaremos con el con los EPIs necesarios.

5. Observaciones.

Los valores de referencia de la concentración de proteínas en plasma son, para los adultos, entre 6'6-8'3 g/dl.

6. Conclusiones.

El sujeto se encuentra dentro de los valores normales de concentración de proteínas totales en plasma, por lo que no posee ninguna patología asociada.