Práctica 13: determinación cuantitativa de colesterol HDL.

1. Introducción.

Las partículas de HDL son lipoproteínas de alta densidad que transportan el colesterol desde los tejidos del cuerpo hasta el hígado. Debido a que las HDL pueden retirar el colesterol de las arterias y transportarlo de vuelta al hígado para su excreción, se les conoce como el colesterol o 'liporpoteína buena', ya que niveles elevados están relacionados con un menor riesgo cardiovascular. La determinación de dichas partículas se realiza en dos pasos: eliminando las liporpoteínas no-HDL y midiendo el HDLc.

Utilizaremos el plasma de tres sujetos diferentes: 

• Elena: ese día consumió una dieta alta en grasas insaturadas. Es deportista y sigue una dieta saludable.
• Jesús: ese día consumió una dieta alta en grasas saturadas. Es sedentario y su dieta suele ser alta en azúcares y grasas.
• Victoria: ese día consumió una dieta alta en azúcares y grasas trans. Es sedentaria y tiene tiene colesterol por predisposición genética.

2. Materiales.

• Espectrofotómetro.
• Centrífuga.
• Gradilla.
• 3 cubetas para espectrofotometría.
• Portacubetas.
• Muestras de plasma.
• Reactivos: R1, calibrador y R2.
• Micropipeta.
• Puntas para micropipeta.
• 
  

3. Procedimiento.

Tras la extracción de las muestras de sangre, llevaremos los tubos a la centrífuga para separar los diferentes componentes de la sangre.

Cuando termine los colocamos en una gradilla, con cuidarlo de no agitarlo demasiado por si se pudieran volver a mezclar el plasma y los hematíes.

Colocamos 3 cubetas de espectrofotometría en un portacubetas y los etiquetamos como Blanco, Calibrador y Muestra.

En todas las cubetas pipeteamos 500µl de R1. Cambiamos la punta y pipeteamos 5µl de Calibrador en la cubeta 'Calibrador'; nuevamente cambiamos la punta y volvemos a pipetear 5µl de Muestra en 'Muestra'.

Mezclamos las soluciones presionando hasta el primer tope del émbolo fuera de la cubeta y soltando dentro del líquido, con cuidado de no formar burbujas.

Llevamos las cubetas al espectrofotómetro y medimos la absorbancia de cada una (previamente ajustaremos a cero frente a agua destilada) con una longitud de onda de 550-660 nm. Apuntamos los resultados.

Añadimos 167µl de R2 en las tres cubetas y medimos la absorción nuevamente. Anotamos resultados.

4. Observaciones.

Antes de comenzar con la práctica hicimos un examen macroscópico del plasma. Observamos mayor turbidez en el plasma de Jesús (izquierda) que en el de Elena (derecha), el cuál era más brillante. Esto se debe a los diferentes estilos de vida y dieta de ambas personas.

Los resultados de medición de la absorbancia fueron los siguientes:

Aplicamos la siguiente fórmula en cada sujeto:

Jesús: 41'77 mg/dl de HDL colesterol en la muestra.

Elena: 68'41 mg/dl de HDL colesterol en la muestra.

Victoria: 81'34 mg/dl de HDL colesterol en la muestra.

5. Conclusiones.

Jesús es el que tiene el colesterol HDL más bajo debido al tipo de dieta y vida que lleva. Esto da lugar a que él tendrá más facilidad para ganar tejido adiposo, ya que tendrá menos moléculas que transporten el colesterol desde los tejidos del cuerpo hasta el hígado.

Elena tiene el colesterol HDL más alto debido a que tiene más moléculas que transportan el colesterol hacia el hígado para ser procesado. Esto se debe a la dieta alta en grasas insaturadas de ese día y vida activa habitual.

Victoria, por otro lado, tiene una enfermedad genética que le provoca tener el colesterol elevado (el HDL también).

Concluimos que para elevar el HDL es necesario seguir un estilo de vida saludable, con una dieta balanceada y deporte frecuente. Además, comprobamos que el consumo de grasas insaturadas en lugar de saturadas elevan el HDL (y disminuyen el LDL, por otro lado).

6. Normas de seguridad y posibles peligros.

Atenderemos al riesgo eléctrico de la toma de corriente del espectrofotómetro evitando que entren en contacto las manos o conductores eléctricos directamente con la toma. También evitaremos usarlo con las manos mojadas, sobre todo en la operación de enchufe y desenchufe, o la entrada de agua al sistema eléctrico. No se mira directamente a la llama ni a las fuentes de emisión (lámparas).

Evitaremos la entrada de líquido al sistema por colocar la micropipeta en horizontal o al revés, así como no usar punta de micropipeta. Podrían ocasionar la contaminación y rotura de la micropipeta.