Práctica 14: estudio de la digestión de principios inmediatos en heces.

1. Introducción.

La investigación de los principios inmediatos en heces debe de realizarse a nivel macroscópico y miscroscópico. En primer lugar se realiza un análisis a simple vista donde observaremos su consistencia, color, olor y forma; además de buscar trozos de carne, fragmentos de fécula, grasas neutras, moco, pus y sangre que puedan darnos indicios de anormalidad en la digestión (en este momento también se podrían ver la presencia de parásitos).

A continuación se realiza un análisis microscópico mediante diferentes reactivos adicionados y la visualización por microscopía a 10x y 40x.

Además, realizaremos un test de sangre oculta en heces (SOH) para detectar sangre en heces. La presencia de la misma puede ser signo de cáncer colorrectal u otros problemas, tales como pólipos o úlceras. 

Por otro lado, también llevaremos a cabo la reacción de Fehling por la cual se detectará la presencia de azúcares reductores en heces.

2. Materiales.

• Cápsula de porcelana.
• Espátula.
• Portaobjetos y cubreobjetos.
• Microscopio óptico.
• Mechero Bunsen.
• Lugol.
• Sudán III.
• Sudán III con ácido acético.
• Agua destilada.
• Muestra de heces.
• Kit de SOH.
• Pipeta Pasteur.
• Pinzas de madera.
• Tubo de ensayo de 20 ml apróx.
• HCl.
• Reactivo de Benedit.

3. Procedimiento.

Test de sangre oculta en heces (SOH)

Abrimos la muestra de heces y dejamos su tapón boca arriba fuera del área de trabajo. Con agilidad desenroscamos el tapón unido al muestreador del tubo e introducimos su extremo en puntos diferentes de la muestra. Lo sacamos e introducimos en el vial, cerramos la muestra inicial y agitamos el vial para que se homogeneice la suspensión.

Seguidamente extraemos la placa del sobre y la colocamos sobre una superficie plana donde dispensaremos 5 gotas de la solución de extracción en la ventana circular marcada con una S. Esperamos 5 minutos a que aparezcan los resultados.

Análisis macro y microscópico.

En una cápsula de vidrio depositamos una pequeña cantidad de heces (como un grano de arroz o un guisante) de la anterior muestra. Añadimos también la misma cantidad de agua destilada, que mezclaremos con la misma espátula.

Tomamos una gota de la papilla y la dejamos caer en 4 portas distintos etiquetados como 'En fresco', 'Sudán III', 'Sudán III+Ac. Acético' y ' Lugol'.

Además, en cada portaobjetos depositaremos una gota de su respectivo reactivo. Finalizamos la preparación colocando el cubreobjetos y llevando a hervir la preparación de Sudán III y calentando la de ácido acético+Sudán III en el mechero Bunsen.

Reacción de Fehling.

La reacción de

4. Observaciones.

En fresco.

Sudán III.

Se pueden observar algunos glóbulos teñidos de rojo indicativos de la presencia de grasas neutras y ácidos grasos.
También aquí observamos pelos vegetales.

Sudán III + Ác. Acético.

 Posible placa.

 Tejido celular vegetal.

 Ninguna evidencia de un exceso de placas y agujas finas por presencia de jabones.

Lugol.

Tampoco es observable ningún color azul-violáceo o negro que nos indique mala digestión de hidratos de carbono, así como fibras musculares mal digeridas.

5. Conclusiones.

Solo pudimos apreciar grasas neutras y ácidos grasos en la tinción de Sudan III; no obstante, no se encuentran en exceso por lo que el paciente está en un correcto estado de salud y no refleja ninguna patología asociada a la digestión de principios inmediatos.

6. Normas de seguridad y posibles peligros.

Estaremos atentos a que los objetivos del microscopio no topen con el mismo. El exceso de presión podrá romper el portaobjetos y echar a perder la práctica, además de provocar posibles fisuras en la lente del objetivo. Atenderemos al riesgo eléctrico de la toma de corriente del microscopio evitando que entren en contacto las manos o conductores eléctricos directamente con la toma. También evitaremos usarlo con las manos mojadas, sobre todo en la operación de enchufe y desenchufe, o la entrada de agua al sistema eléctrico. No ingerir ni tocar ninguna parte de la cara cuando se estén utilizando los colorantes. Prestar especial atención a la hora de secar y/o fijar con el mechero Bunsen, teniendo en cuenta que ningún reactivo inflamable ni objeto cualquiera se encuentre cerca. Cuando terminemos de usarlo, nos cercioraremos de que está bien cerrado y no hay escape de gas.

Práctica 13: determinación cuantitativa de colesterol HDL.

1. Introducción.

Las partículas de HDL son lipoproteínas de alta densidad que transportan el colesterol desde los tejidos del cuerpo hasta el hígado. Debido a que las HDL pueden retirar el colesterol de las arterias y transportarlo de vuelta al hígado para su excreción, se les conoce como el colesterol o 'liporpoteína buena', ya que niveles elevados están relacionados con un menor riesgo cardiovascular. La determinación de dichas partículas se realiza en dos pasos: eliminando las liporpoteínas no-HDL y midiendo el HDLc.

Utilizaremos el plasma de tres sujetos diferentes: 

• Elena: ese día consumió una dieta alta en grasas insaturadas. Es deportista y sigue una dieta saludable.
• Jesús: ese día consumió una dieta alta en grasas saturadas. Es sedentario y su dieta suele ser alta en azúcares y grasas.
• Victoria: ese día consumió una dieta alta en azúcares y grasas trans. Es sedentaria y tiene tiene colesterol por predisposición genética.

2. Materiales.

• Espectrofotómetro.
• Centrífuga.
• Gradilla.
• 3 cubetas para espectrofotometría.
• Portacubetas.
• Muestras de plasma.
• Reactivos: R1, calibrador y R2.
• Micropipeta.
• Puntas para micropipeta.
• 
  

3. Procedimiento.

Tras la extracción de las muestras de sangre, llevaremos los tubos a la centrífuga para separar los diferentes componentes de la sangre.

Cuando termine los colocamos en una gradilla, con cuidarlo de no agitarlo demasiado por si se pudieran volver a mezclar el plasma y los hematíes.

Colocamos 3 cubetas de espectrofotometría en un portacubetas y los etiquetamos como Blanco, Calibrador y Muestra.

En todas las cubetas pipeteamos 500µl de R1. Cambiamos la punta y pipeteamos 5µl de Calibrador en la cubeta 'Calibrador'; nuevamente cambiamos la punta y volvemos a pipetear 5µl de Muestra en 'Muestra'.

Mezclamos las soluciones presionando hasta el primer tope del émbolo fuera de la cubeta y soltando dentro del líquido, con cuidado de no formar burbujas.

Llevamos las cubetas al espectrofotómetro y medimos la absorbancia de cada una (previamente ajustaremos a cero frente a agua destilada) con una longitud de onda de 550-660 nm. Apuntamos los resultados.

Añadimos 167µl de R2 en las tres cubetas y medimos la absorción nuevamente. Anotamos resultados.

4. Observaciones.

Antes de comenzar con la práctica hicimos un examen macroscópico del plasma. Observamos mayor turbidez en el plasma de Jesús (izquierda) que en el de Elena (derecha), el cuál era más brillante. Esto se debe a los diferentes estilos de vida y dieta de ambas personas.

Los resultados de medición de la absorbancia fueron los siguientes:

Aplicamos la siguiente fórmula en cada sujeto:

Jesús: 41'77 mg/dl de HDL colesterol en la muestra.

Elena: 68'41 mg/dl de HDL colesterol en la muestra.

Victoria: 81'34 mg/dl de HDL colesterol en la muestra.

5. Conclusiones.

Jesús es el que tiene el colesterol HDL más bajo debido al tipo de dieta y vida que lleva. Esto da lugar a que él tendrá más facilidad para ganar tejido adiposo, ya que tendrá menos moléculas que transporten el colesterol desde los tejidos del cuerpo hasta el hígado.

Elena tiene el colesterol HDL más alto debido a que tiene más moléculas que transportan el colesterol hacia el hígado para ser procesado. Esto se debe a la dieta alta en grasas insaturadas de ese día y vida activa habitual.

Victoria, por otro lado, tiene una enfermedad genética que le provoca tener el colesterol elevado (el HDL también).

Concluimos que para elevar el HDL es necesario seguir un estilo de vida saludable, con una dieta balanceada y deporte frecuente. Además, comprobamos que el consumo de grasas insaturadas en lugar de saturadas elevan el HDL (y disminuyen el LDL, por otro lado).

6. Normas de seguridad y posibles peligros.

Atenderemos al riesgo eléctrico de la toma de corriente del espectrofotómetro evitando que entren en contacto las manos o conductores eléctricos directamente con la toma. También evitaremos usarlo con las manos mojadas, sobre todo en la operación de enchufe y desenchufe, o la entrada de agua al sistema eléctrico. No se mira directamente a la llama ni a las fuentes de emisión (lámparas).

Evitaremos la entrada de líquido al sistema por colocar la micropipeta en horizontal o al revés, así como no usar punta de micropipeta. Podrían ocasionar la contaminación y rotura de la micropipeta.

Práctica 11: sedimento de orina.

1. Introducción.

El examen general de orina es una de las pruebas más solicitadas dentro del laboratorio de análisis clínicos e incluye el análisis físico, químico y análisis microscópico. En este último, se analiza el sedimento urinario tras centrifugación de la orina en búsqueda de distintos elementos formes (leucocitos, cilindros, etc.) con diferente utilidad diagnóstica.

2. Materiales.

• Muestra de orina.
• Tubos cónicos de centrifugación.
• Pipeta Pasteur.
• Gradilla.
• Portaobjetos de recuento
• Microscopio óptico.
• Centrífuga.

3. Procedimiento.

Tras extraer la muestra, abriremos el frasco que contiene el espécimen y lo dejaremos boca arriba sobre la superficie de trabajo, en un lugar algo alejado de donde estemos realizando la prueba.

Pipetearemos con la pipeta Pasteur del contenido del frasco e iremos vertiendo los volúmenes al tubo cónico tantas veces como haga falta hasta enrasar en 10 ml. Cerramos el tubo y lo llevamos a la centrífuga, el cual lo equilibraremos con los tubos de los demás compañeros. Cerramos la tapa de la centrífuga y seleccionamos la velocidad y el tiempo adecuado: 5 min. a 2.000 rpm.

Cuando la centrífuga de la señal de finalización, abrimos la tapa y sacamos los tubos para depositarlos en una gradilla.

Abrimos el tapón y extraemos el sobrenadante con la pipeta Pasteur, llevando el desecho al desagüe. Debemos dejar algo de líquido en la punta cónica para resuspender el sedimento con ella. Tal y como se cita, resuspendemos el final y vertemos una gota del mismo en la casilla del portaobjetos que corresponde, la cual se extenderá por la superficie por capilaridad.

Llevamos el portaobjetos al microscopio, sobre la platina y sujetado por la pinza. Enfocamos a 40x y observamos tras los oculares. Esto fue lo visualizado:

Paciente 1 (Almu)
Burbuja de aire y posible fosfato triple.

Paciente 2 (Gemma)
Glóbulo blanco, monocito y linfocito.

Paciente 3 (Anaís)
Posible fosfato triple y ácido úrico.

Paciente 4 (Elena)
Se observan diversos cristales.

Paciente 5 (Jose)
Fibra.

4. Normas de seguridad y posibles peligros.

Atenderemos al riesgo eléctrico de la toma de corriente del espectrofotómetro evitando que entren en contacto las manos o conductores eléctricos directamente con la toma. También evitaremos usarlo con las manos mojadas, sobre todo en la operación de enchufe y desenchufe, o la entrada de agua al sistema eléctrico.

5. Observaciones.

No se observa nada patológico y/o anormal en el sedimento de orina.

6. Conclusiones.

La salud de los pacientes está correctamente, ya que no se observa ningún anormal en sedimento de orina.